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脂質體的製備方法——超聲法

脂質體的製備方法——超聲法

 

對於各種磷脂水分散體進行超聲處理,是zui早采用的處理兩親性脂質的機械方法之一。由於局部受熱和高能量的輸入,樣品不必加熱到相變溫度上。

超聲技術有兩種:一種是將超聲儀的探頭進入脂質體分散體中;另一種是將樣品放在試管或燒杯內,再置於水浴式超聲儀中。

探頭式超聲可能是小規模製備SUV應用zui廣泛的方法。此法將jigao的能量輸入脂質分散體中,可直接用於MLV。探頭處能量的釋放會導致局部過熱,因此(盛有樣品的)容器必須進入冰/水浴中。注意: 超聲達到1h,會有5%以上的磷脂發生脫酯化(水解)。

 

超聲法製備脂質體

設備與試劑

簡易台式離心機

自製的專用耐熱玻璃錐形離心管(也可用普通燒瓶,如25mL或50mL的圓底燒瓶)

超聲波細胞破碎儀

  1. 棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿  (DPPC)

    方法

  1. 1-10ml MLV 分散體(參照手搖法)置於錐形離心管中,之後放在0℃水浴中

  2. 將超聲波細胞破碎儀的換能器探頭浸入樣品中,並準確調整其高度至稍高於容器底部1cm(0.4英寸)。

  3. 通入氮氣(如果使用不飽和磷脂,此步驟尤為重要)。

  4. 接通超聲波細胞破碎儀,調節超聲功率至輸出功率為100W左右。

  5. 將定時器設為10—60min,有效超聲時間為50%—100%。分散體必須從乳白色轉變為呈乳光狀—對著日光能透過樣品看清窗框。

  6. 用簡易台式離心機12000r/min離心10—15min,除去較大的粒子(<3%)和從換能器探頭上脫落的金屬屑(鈦)。

    注:超聲法製得的小囊泡(d<40nm)通常處於亞穩態。融合成直徑為60—80nm的囊泡後,可將脂質雙分子層的高曲率能量釋放出來。因此,建議將囊泡置於暗處,室溫放置過夜。100000g離心1h除去經探頭超聲後仍存在的小部分MLV。許多可被包封的分子經過劇烈超聲都會受到破壞

    摘自《藥學專著譯叢——脂質體(原著第2版)》

     

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